Anthony Mackie nació en Nueva Orleans y estudió actuación en Juilliard, después de pasar por la New Orleans Center for Creative Arts. Llegó al cine desde el teatro: su primera aparición importante fue 8 Mile, y poco después tuvo un papel que llamó la atención en Brother to Brother.

Su trabajo como el rapero Tupac Shakur en Notorious mostró una disposición para encarnar figuras reales sin convertirlas en imitación plana. Luego se movió entre dramas como The Hurt Locker, ciencia ficción y comedias, hasta quedar asociado globalmente a Sam Wilson/Falcon en el universo Marvel. Desde Captain America: The Winter Soldier, el personaje fue ganando peso hasta asumir el manto de Captain America.